Domaines d'activités
|
|
|
 |
|
Immunologie > Neurosciences
 | |  | |
A Diagnosis Marker for medulloblastoma (neuroblastoma)
PSA-NCAM/PSA-CD56 ELISA:
Enzyme-linked immunosorbent assay for quantitative detection of PSA-NCAM (PSA-CD56).
Polysialic acid (PSA) on NCAM is a carbohydrate modulating homophilic and heterophilic adhesion mediated by NCAM, is also known to be re-expressed in several human tumors, thus can be considered as an oncodevelopmental antigen. Medulloblastomas (MBs) are highly malignant tumors that arise from the cerebellum and occur mainly in children ; they have a high frequency of metastasis through the CSF. At present, the diagnosis of meningeal spread is based both on imaging (computed tomographic scan or magnetic resonance imaging and cytologic examination). Howewer, these techniques sometime fail to detect recurrences.
PSA-NCAM levels can be measured in CSF using a double site enzyme-linked immunoadsorbant assay (ELISA). Below data in 145 samples from 14 controls and 29 patients with MB [15].
| Time |
PSA-NCAM/Cytology |
PSA-NCAM/Imaging |
PSA-NCAM/Clinical |
| 1 month after surgery |
0.37/ weak |
0.89/ excellent |
0.43/ average |
| During treatment |
0.82/ excellent |
0.62/ good |
0.82/ excellent |
| After treatment |
0.72/ excellent |
0.54/ average |
0.72/ good |
Table 1 Agreement Between PSA-NCAM and Cytology, imaging, and Clinical Data at three Time Periods Following Surgery.
PSA-NCAM was never detected in control CSF. PSA-NCAM concentration medians were higher in CSF with metastatic cells or in patients showing abnormal imaging than in the corresponding normal groups (P < .05). The PSA-NCAM concentration median was significantly higher(P < .05) in CSF from patients refractory to treatment or who relapsed than from patients in remission. Agreements between PSA-NCAM and clinical status and between PSA-NCAM and cytology were excellent during and after treatment. The sensitivity of PSA-NCAM test was always better than that of cytology, whereas its specificity was lower for phases that corresponded to more than 1 month following surgery. Specificity was 100% for patients refractory to treatment or with relapse.
Description
Code : AbC0027
Dénomination: PSA-NCAM ELISA
Intended use : The PSA-NCAM ELISA is to be used for the quantitative determination of PSA-NCAM in serum, plasma, cell extract or tissue extract.
Specificity :
recognizes human, rat and mouse polysialylated NCAM (PSA-NCAM/PSA-CD56).
Other species have not been tested, but are likely to be recognized as well.
Range : 0,25 ng/ml - 16 ng/ml
Sensitivity : 0,25 ng/ml
Sample types : serum, plasma, cell extract or tissue extract
Sample size : 100 microliters
Quantity : reagents sufficient for 96 wells
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| AbC0027 |
PSA-NCAM ELISA (Polysialique-acide NCAM ELISA)
|
|
Kit |
96 puits |
 |
 |
 |
 |
|
|
 |
|
 |
Demonstration of sensitive and accurate measurement of PSA-NCAM in brain tissue and serum
| | | |
 |
Serial dilutions of an extract of mouse embryonic brain (E16) tissue was performed. PSA-NCAM was measured by ELISA test from mouse brain tissue. A dose response was obtained.
|
| | | | |
| | | |
 |
An extract from a human rhabdomyosarcoma cell line was diluted either in PBS or serum, and the curves below show that PSA-NCAM measurement was not inhibited, nore enhanced, by serum compared to PBS. This demonstrates that human PSA-NCAM will be measurable accurately in serum from patients
|
| | | | |
Assesment of sensitivity :
| | | |
 |
Purified PSA-NCAM from new born mice was tested in the ELISA assay and a standard curve was plotted. The sensitivity was determined to be 0,25 ng of purified PSA-NCAM per ml. The test is therefore highly sensitive.
|
| | | | |
Demonstration of PSA-NCAM measurement specificity
The enzyme endoneuraminidase (endoN), which digest PSA was used to determine the specificity of the test. The results are presented below.
| | | |
 |
(l) : Non digested PSA-NCAM. (s) : Endoneuraminidase treated PSA-NCAM. After PSA digestion, the signal is almost completely abolished for the lower concentration of extract, and considerably reduced for the higher concentrations. The residual signal is due to an incomplete digestion by the enzyme. As expected, considering the specificites of the antibodies, the ELISA test is specific for the detection of PSA-NCAM. |
| | | | |
| | | | |
| | | |
Alzheimer disease
AbCys currently offer a variety of highly sensitive and specific ELISA test kits for the quantification of human Amyloid beta -40 and -42 peptides as well as ELISA for APP Amyloid Precursor Protein
AMYLOID [1-40] COLORIMETRIC ELISA KIT, HU
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| 94-0063 |
Cell Based ELISA assay for Amyloid 40
|
|
kit |
97 (1 plate) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Description: For the quantitative determination of A 40 peptide. Recognizes both natural and recombinant human -Amyloid 1-40.
Sensitivity: <6 pg/mL
Range: 7.8-500 pg/mL
Incubation Time: 4 hours
AMYLOID [1-42] COLORIMETRIC ELISA KIT, HU, MK, CH, RB
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| 94-0062 |
Cell Based ELISA assay for Amyloid 42
|
|
kit |
98 (1 plate) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Description:For the quantitative determination of A 42 peptide. Recognizes both natural and recombinant human -Amyloid 1-42.
Sensitivity: <10 pg/mL
Range: 15.6-1000 pg/mL
Incubation Time: 6.5 hours
Amyloid Precursor Protein : APP ELISA KIT
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| 94-0015 |
Cell Based ELISA assay for APP Human
|
|
kit |
96 (1 plate) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Description: The Human APP kit (Hu APP) is a solid phase sandwich Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay (ELISA). The kit is specific for measurement of total APP protein and found to have no cross-reactivity: Tau, -synuclein, -synuclein, A1-40, and A1-42. This assay may also recognize mouse APP.
Sensitivity: <0.4 ng/mL
Range: 0-50 ng/mL
Sample: The Human APP ELISA is designed to specifically detect and quantify the levels of the APP in human cerebral spinal fluid samples (CSF) and human cell lysates. The assay will recognize both natural and recombinant human APP, To confirm the specificity of this kit, cell extracts from several cell lines at a concentration of 200 g/mL protein (Figure 1) and human cerebral spinal fluids at 1:16 dilution (Figure 2) were analyzed simultaneously by ELISA and Western blot. The data show that the levels of APP protein detected with this ELISA kit are consistent with results obtained by Western blot analysis (inset in graphs).
| | | | |
| | | |
Votre thématique concerne les maladies neurodégénératives type Alzheimer, Parkinson.
Vous travaillez plutôt sur la neurogénèse.
Vous vous intéressez à la migration des précurseurs neuronaux, à la formation des synapses hippocampales, à la neurotoxicologie.
Vous cherchez un nouveau marqueur pour le diagnostic ou le pronostic du neuroblastome.
AbCys votre spécialiste en Neurosciences, met à votre disposition un choix d’anticorps, de protéines recombinantes et de Kits de dosages pour vos études.
AbCys propose maintenant l'anticorps anti-PolySialic Acid-NCAM (anti PSA-NCAM) développé dans le laboratoire du docteur Geneviève ROUGON, Directeur de Recherche à Marseille.
Cet anticorps est dirigé contre un polymère d'acide sialique communément nommé PSA (PolySialic Acid). Chez les vertébrés, PSA est associé à la molécule NCAM (Neural Cell Adhesion Molecule) ou CD56, chez les bactéries il est présent au niveau de la capsule des Meningocoques du groupe B.
L’anti-PSA-NCAM (anti-polysialic acid-NCAM : référence AbC0019) a des applications dans des domaines très variés :
- Le PSA-NCAM intervient dans la migration des précurseurs neuronaux et la formation des synapses hippocampales.
- Le PSA-NCAM, c'est aussi un nouveau marqueur pour le diagnostic et le pronostic du neuroblastome chez l’enfant (S Glüer and al. Langenbecks Arch Chir Suppl Kongressbd. 1998;115(Suppl I):289-9).
- Le PSA –NCAM est également un marqueur utilisable en neurotoxicologie, comme le montre son application dans le suivie des traitements aux anti-depresseur (Taylor C and al ; Cell Signal.2005, Banasr M and al, Neuropsychopharmacology 2004). Les anti-depresseur sont efficaces en stimulant la neurogénèse chez l’adulte, et le PSA-NCAM est un bon marqueur de cette neurogénèse et de la plasticité en général.
| | | | |
| | | |
Endoneuraminidase-N (Endo-N)
Endo-N est un endosialidase (enzyme) qui dégrade rapidement et spécifiquement les polymères linéaires d'acide sialique d’une longueur minimale de 7-9 résidus avec liaisons a-2,8, caractéristique des résidus d’acides sialic associés à NCAM.
Applications :
- permet un clivage de PSA sur le NCAM en conditions physiologiques.
- la préparation n'est pas toxique et peut être utilisée sur des cellules cultivées vivantes
- peut etre utilisé sur des coupes de tissu
- injectable in-vivo
| | | | |
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| AbC0019 |
PSA-NCAM (Polysialique-acide NCAM)
|
2-2B |
Mc |
50 µl |
|
|
|
|
| AbC0020 |
Endo-N (Endoneuraminidase-N) pour utilisation in vivo
|
|
Ag |
50 µl (35 U) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| | | |
|
Anti PolySialic Acid-NCAM : anti-PSA NCAM AbC0019
|
I - Product Introduction
Neural Cell Adhesion Molecule (NCAM) and its polysialylated form PSA-NCAM has been found to be involved in various aspects of neural and synaptic plasticity.
AbCys mouse antibody to PolySialic Acid NCAM (PSA-NCAM: catalog Number AbC0019) was produced to viable Meningococcus group B (strain 355). AbC0019 reacts with alpha 2-8 linked neuraminic acid (NeuAc-alpha 2-8) n, with n > 10.This polymer is usually termed polysialic acid (PSA). In vertebrates PSA is essentially, if not exclusively linked to NCAM, (CD56), in bacteria it is associated with capsula of meningococcus strain group B.
The monoclonal 2-2B (mouse IgM) can be used for Western Blot, Immunochemistry, Cell sorting, RIA.
Universal : AbC0019 is not species-specific and could be used in various species (including mouse).
Localization of PSA in the adult rat dorsal vagal complex (DVC) (A,B).
(A) Transverse section of rat caudal medulla showing the distribution of PSA immunolabeling using mouse IgM anti-PSA monoclonal antibody (dilution 1/2000 of the ascitic fluid).
(B) Confocal observation of immunofluorescence double-staining with anti-PSA (green) and anti-GAP-43 (red) antibodies showing a punctate distribution of PSA in close apposition with GAP-43 staining in the dorsal vagal complex. The staining is reminescent of a synaptic or perisynaptic localization of PSA. Abbreviations : AP : Area Postrema ; ST : Solitary Tract ; NST : Nucleus of the Solitary Tract (mNST : medial NST) ; DMX : Dorsal Motor Nucleus of the Vagus Nerve ; XII : Hypoglossal Nucleus. Quantitative analysis of regulation of PSA expression (C,D):.
(C) Enlarged section showing PSA immunoreactivity in the DVC after stimulation of the cervical vagus nerve (15 min, 30 Hz). The arrow shows the stimulated side.
(D) Example of a typical western blot showing the expression of PSA in Control and in stimulated adult rat (St) in the DVC and in the Hypoglossal Nucleus (XII).
DVC was separated in two halves and immunoreactivity separately detected in each of them.
Note the decrease of immunoreactivity on the stimulated side detectable both by immunohistochemistry and immunoblot with the anti-PSA antibody.
These data are from : Bouzioukh F, Tell F., Jean A., and Rougon G. (2001) NMDA receptor and NO-synthase activation regulate PSA-NCAM expression in adult brainstem synapses. J. Neuroscience Vol 2 n°3 July 1 pp 4721-4730.
Abbreviations :
AP : Area Postrema, ST : Solitary Tract, NST : Nucleus of the Solitary Tract (mNST : medial NST), DMX : Dorsal Motor Nucleus of the Vagus Nerve, XII : Hypoglossal Nucleus.
| | | | |
| | | |
II - Applications
A Diagnosis Marker for medulloblastoma (neuroblastoma)
PSA-NCAM/PSA-CD56 ELISA:
Enzyme-linked immunosorbent assay for quantitative detection of PSA-NCAM (PSA-CD56).
Polysialic acid (PSA) on NCAM is a carbohydrate modulating homophilic and heterophilic adhesion mediated by NCAM, is also known to be re-expressed in several human tumors, thus can be considered as an oncodevelopmental antigen. Medulloblastomas (MBs) are highly malignant tumors that arise from the cerebellum and occur mainly in children ; they have a high frequency of metastasis through the CSF. At present, the diagnosis of meningeal spread is based both on imaging (computed tomographic scan or magnetic resonance imaging and cytologic examination). Howewer, these techniques sometime fail to detect recurrences.
PSA-NCAM levels can be measured in CSF using a double site enzyme-linked immunoadsorbant assay (ELISA). Below data in 145 samples from 14 controls and 29 patients with MB [15].
| Time |
PSA-NCAM/Cytology |
PSA-NCAM/Imaging |
PSA-NCAM/Clinical |
| 1 month after surgery |
0.37/ weak |
0.89/ excellent |
0.43/ average |
| During treatment |
0.82/ excellent |
0.62/ good |
0.82/ excellent |
| After treatment |
0.72/ excellent |
0.54/ average |
0.72/ good |
Table 1 Agreement Between PSA-NCAM and Cytology, imaging, and Clinical Data at three Time Periods Following Surgery.
PSA-NCAM was never detected in control CSF. PSA-NCAM concentration medians were higher in CSF with metastatic cells or in patients showing abnormal imaging than in the corresponding normal groups (P < .05). The PSA-NCAM concentration median was significantly higher(P < .05) in CSF from patients refractory to treatment or who relapsed than from patients in remission. Agreements between PSA-NCAM and clinical status and between PSA-NCAM and cytology were excellent during and after treatment. The sensitivity of PSA-NCAM test was always better than that of cytology, whereas its specificity was lower for phases that corresponded to more than 1 month following surgery. Specificity was 100% for patients refractory to treatment or with relapse.
Description
Code : AbC0027
Dénomination: PSA-NCAM ELISA
Intended use : The PSA-NCAM ELISA is to be used for the quantitative determination of PSA-NCAM in serum, plasma, cell extract or tissue extract.
Specificity :
recognizes human, rat and mouse polysialylated NCAM (PSA-NCAM/PSA-CD56).
Other species have not been tested, but are likely to be recognized as well.
Range : 0,25 ng/ml - 16 ng/ml
Sensitivity : 0,25 ng/ml
Sample types : serum, plasma, cell extract or tissue extract
Sample size : 100 microliters
Quantity : reagents sufficient for 96 wells
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| AbC0027 |
PSA-NCAM ELISA (Polysialique-acide NCAM ELISA)
|
|
Kit |
96 puits |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
PSA-NCAM measurement is a new biologic marker of possible use in the management of patients with MB.
B - PSA-NCAM : Marker for neurotoxicolgy
Example 1 : Nicotine Effect on the Hippocampal Plasticity [22].
Neurogenesis, which defines the production of new neurons by active proliferation of progenitor cells, is maintained in the adult dentate DG of the hippocampus, and this phenomenon seems to play an important role in learning. Modifications of PSA-NCAM expression in mice deleted for NCAM the PSA carrier, results in morphological modifications, perturbations of synaptic plasticity and impairment of cognitive functions.
The effects of nicotine addiction on plasticity related processes in the DG has been studied in animals trained to self –administer nicotine were investigated [22].
Figure 2 Illustration of PSA-NCAM labeled cells in the dentate gyrus.Microphotography of PSA-NCAM staining in a control animal (a) and in an animal self- administering 0.04mg/kg per infusion of nicotine. H, Hilus Magnification 100X
Because PSA-NCAM is expressed by newborn cells, the decrease in PSA-NCAM observed here (see b in fig. 2) results essentially from a decrease in neurogenesis.
In this study it was found that nicotine self-administration profoundly decreased the expression of PSA-NCAM and neurogenesis in the DG. In parallel, cell death was increased. PSA- NCAM can serve as a useful early marker in neurotoxicolgy.
Example 2 : PSA-NCAM and antidepressants.
Treatment with antidepressants leads to adaptive changes such as modifications of neurogenesis. PSA-NCAM is a useful marker to follow the levels of neurogenesis and can so serve as marker to follow the efficiency of antidepressants [19-20-21].
| | | | |
| | | |
III - REFERENCES
1. Bouzioukh F, Tell F., Jean A., and Rougon G. (2001) NMDA receptor and NO-synthase activation regulate PSA-NCAM expression in adult brainstem synapses. J. Neuroscience Vol 2 n°3 July 1 pp 4721-4730.
2. Rougon, G., Deagostini-Bazin, H., Hirn, M., and Goridis, C. (1982). Tissue- and developmental stage-specific forms of a neural cell surface antigen linked to differences in glycosylation of a common polypeptide. Embo J 1, 1239-1244.
3. Häyrinen, J., Jennings, H., Raff, H., Rougon, G., Gerardy-Schann, R., Finne, J. (1995): Antibodies to polysialic acid in its N-propyl derivative: binding properties and interaction with human embryonal brain glycopeptides. J. Infectious Diseases. 171: 1481-1490.
4. Rougon, G., Dubois, C., Buckley, N., Magnani, J. L., and Zollinger, W. (1986). A monoclonal antibody against meningococcus group B polysaccharides distinguishes embryonic from adult N-CAM. J Cell Biol 103, 2429-2437.
5. Theodosis, D. T., Rougon, G., and Poulain, D. A. (1991). Retention of embryonic features by an adult neuronal system capable of plasticity: polysialylated neural cell adhesion molecule in the hypothalamo-neurohypophysial system. Proc Natl Acad Sci U S A 88, 5494-5498.
6. Theodosis, D. T., Bonhomme, R., Vitiello, S., Rougon, G., and Poulain, D. A. (1999). Cell surface expression of polysialic acid on NCAM is a prerequisite for activity-dependent morphological neuronal and glial plasticity. J Neurosci 19, 10228-10236.
7. Figarella-Branger, D., Dubois, C., Chauvin, P., De Victor, B., Gentet, J. C., and Rougon, G. (1996). Correlation between polysialic-neural cell adhesion molecule levels in CSF and medulloblastoma outcomes. J Clin Oncol 14, 2066-2072.
8. Ben-Hur, T., Rogister, B., Murray, K., Rougon, G., and Dubois-Dalcq, M. (1998) Growth and Fate of PSA-NCAM+ Precursors of the Postnatal Brain J. Neurosci. 18: 5777-5788.
9. Trouillas J, Daniel L, Guigard MP, Tong S, Gouvernet J, Jouanneau E, Jan M, Perrin G, Fischer G, Tabarin A, Rougon G, Figarella-Branger D. Polysialylated neural cell adhesion molecules expressed in human pituitary tumors and related to extrasellar invasion. J Neurosurg. 2003 May;98(5):1084-93.
10. Poongodi GL, Suresh N, Gopinath SC, Chang T, Inoue S, Inoue Y. Dynamic change of neural cell adhesion molecule polysialylation on human neuroblastoma (IMR-32) and rat pheochromocytoma (PC-12) cells during growth and differentiation. J Biol Chem. 2002 Aug 2;277(31):28200-11. Epub 2002 May 21.
11. Daniel L, Durbec P, Gautherot E, Rouvier E, Rougon G, Figarella-Bran ger D. A nude mice model of human rhabdomyosarcoma lung metastases for evaluating the role of polysialic acids in the metastatic process. Oncogene. 2001 Feb 22;20(8):997-1004.
12. Mayanil CS, George D, Mania-Farnell B, Bremer CL, McLone DG, Bremer EG. Overexpression of murine Pax3 increases NCAM polysialylation in a human medulloblastoma cell line. J Biol Chem. 2000 Jul 28;275(30):23259-66.
13. Daniel L, Trouillas J, Renaud W, Chevallier P, Gouvernet J, Rougon G, Figarella-Branger D. Polysialylated-neural cell adhesion molecule expression in rat pituitary transplantable tumors (spontaneous mammotropic transplantable tumor in Wistar-Furth rats) is related to growth rate and malignancy. Cancer Res. 2000 Jan 1;60(1):80-5.
14. Kameda K, Shimada H, Ishikawa T, Takimoto A, Momiyama N, Hasegawa S, Misuta K, Nakano A, Nagashima Y, Ichikawa Y. Expression of highly polysialylated neural cell adhesion molecule in pancreatic cancer neural invasive lesion. Cancer Lett. 1999 Apr 1;137(2):201-7.
15. Dubois C, Figarella-Branger D, Rougon G, Rampini C. [Polysialylated NCAM in CSF, a marker for invasive medulloblastoma] C R Seances Soc Biol Fil. 1998;192(2):289-96. French.
16. Gluer S, Zense M, Radtke E, von Schweinitz D. Polysialylated neural cell adhesion molecule in childhood ganglioneuroma and neuroblastoma of different histological grade and clinical stage. Langenbecks Arch Surg. 1998 Oct;383(5):340-4.
17. Gluer S, Schelp C, Gerardy-Schahn R, von Schweinitz D. Polysialylated neural cell adhesion molecule as a marker for differential diagnosis in pediatric tumors. J Pediatr Surg. 1998 Oct;33(10):1516-20.
18. Dubois C, Okandze A, Figarella-Branger D, Rampini C, Rougon G. A monoclonal antibody against Meningococcus group B polysaccharides used to immunocapture and quantify polysialylated NCAM in tissues and biological fluids. J Immunol Methods. 1995 Apr 12;181(1):125-35.
19. Chirisse Taylor, Ashwana D. Fricker, Lakshmi A. Devi, Ivone Gomes Mechanisms of action of antidepressants: from neurotransmitter systems to signaling pathways. Cell Signal. 2005 May;17(5):549-57.
20. Banasr M, Hery M, Brezun JM, Daszuta A. Serotonin mediates oestrogen stimulation of cell proliferation in the adult dentate gyrus. Eur J Neurosci. 2001 Nov;14(9):1417-24.
21. Banasr M, Hery M, Printemps R, Daszuta A. otonin-induced increases in adult cell proliferation and neurogenesis are mediated through different and common 5-HT receptor subtypes in the dentate gyrus and the subventricular zone. Neuropsychopharmacology. 2004 Mar;29(3):450-60.
22. Djoher Nora Abrous, Walter Adriani, Marie Françoise Montaron, Catherin Aurousseau, Geneviève Rougon, Michel Le Moal, Pier Vincenzo Piazza Nicotine Self-Administration Impairs Hippocampal Plasticity. The Journal of Neuroscience, May 1. 2002, 22 (9): 3656-3662
| | | | |
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| AbC0019 |
PSA-NCAM (Polysialique-acide NCAM)
|
2-2B |
Mc |
50 µl |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| | | |
Votre contact :
Manuel SACHA (Product Manager)
| | | | |
| | | |
Les phosphoprotéines sont connues pour être impliquées dans les maladies neurologiques, comme la maladie d'Alzheimer, mais aussi dans les cancers. C'est pourquoi la détection et la quantification de la phosphorylation des protéines sont très utiles dans la recherche sur la fonction de certaines protéines et sur les conséquences des phosphorylations réversibles.
L'un des éléments clefs de ces recherches sont les anticorps phospho-spécifiques car ils ne reconnaissent que les protéines activées ou phopshorylées. Ces protéines contiennent des acides aminés de type sérine et tyrosine phosphorylés.
Les anticorps de la nouvelle gamme neuroscience d'AbCys, de référence ABC72, sont spécifiques des phosphoprotéines et répondent entièrement à ces critères.
3 types d'anticorps : L'immunisation avec un phosphopeptide peut entraîner la production de 3 types d'anticorps différents.
| | | | |
|
| | | |
La phosphorylation est une modification chimique subie par certaines protéines, enzymatiques ou non-enzymatiques, lors d'un processus postérieur à la traduction du programme génétique. Depuis sa mise en évidence chez les eucaryotes, dans les années 50, de nombreux travaux ont mis en avant le rôle essentiel joué par les protéines dans la régulation de plusieurs mécanismes fondamentaux autant intracellulaires qu'extracellulaires.
| | | | |
|
| | | |
Que vous réalisiez des western blot, de l'immunohistochimie, de l'immunofluorescence découvrez de nouveaux anticorps et protéines spécialisés pour vos études. :
- Nos anticorps phospho-spécifiques : 40 références d'anticorps permettant de caractériser les phosphoprotéines (Synapsin I Phospho-Ser603 ; ß-catenin Phospho-Ser33,37 ; Tryptophan Hydroxylase phospho-Ser58...)
- Nos anticorps Pan-spécifiques reconnaissant les protéines quelque soit leur état de phosphorylation et de conformation, en se liant avec des séquences peptidiques n'impliquant pas le groupement phosphorylé. (Tyrosine Hydroxylase; Synapsin I; GABAA recepteur a4, C-Terminus...)
- Nos protéines de transduction du signal tel que CAM Kinase II ou Protein Kinase A et C.
| | | | |
| | | |
 |
|
Marquage immunohistochimique de la rétine avec les anticorps anti Pan-tyrosine Hydroxylase (Pan-TH) et Phospho-spécifique Tyrosine Hydroxylase (Phopsho-TH). L'anticorps Pan -TH montre un marquage important au niveau des photomicrographies de la rétine. Par contre, l'anticorps anti phospho-TH marque uniquement les deux cellules amacrine dans cette rétine stimulée par la lumière.
|
|
| | | | |
| | | |
 |
Western Blot des protéines phosphorylées et déphosphorylées démontrant la spécificité des anticorps phospho-spécifiques.
Les anticorps pan-spécifiques reconnaissent à la fois la tyrosine hydroxylase déphosphorylée (dephospho-TH) et la Tyrosine hydroxylase phosphorylée (Phospho-TH). L'anticorps phospho-sécifique reconnaît uniquement la phospho-TH alors que l'anticorps déphospho-spécifique réagit spécifiquement avec la dephospho-TH.
|
|
| | | | |
 |
Ophtalmologie (Arrestine)
|
 |
|
^
|
|
| | | |
Anti-ARRESTINE
L'arrestine, dénommée préalablement antigène S, fut tout d'abord identifiée comme un auto antigène à l'origine de maladies auto-immunes de l'œil et de la glande pinéale (Figure-1). A l'état purifié, lorsqu'il est injecté à la dose de quelques microgrammes avec un adjuvant, à certaines espèces ou animaux génétiquement sensibles, il provoque une maladie auto-immune rétinienne (l'uvéo-rétinite auto-immune expérimentale (UAE).
Parallèlement, il a été montré que l'antigène S, protéine de 48 kDa, était capable de se lier à la fraction membranaire des segments externes de bâtonnets rétiniens, en présence de lumière, d'ATP ou de GTP, et que cette liaison dépendait de la phosphorylation de la rhodopsine entraînant sa désensibilisation d'où le nom d'arrestine .
L'arrestine (Antigène-S) est constituée d'une seule chaîne polypeptidique, dont la masse moléculaire apparente est de 48kDa en électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS. Toutefois, des valeurs variant de 43 à 55 kDa ont été décrites par différents auteurs. Ces valeurs fluctuent selon la technique de mesure utilIsée. La masse moléculaire calculée à partir des séquences d'acides aminés est de 45kDa pour 403-405 résidus d'amino-acides dans les antigènes S de quatre espèces de mammifères (homme, boeuf, rat et souris). Chez le rat, les séquences des antigènes S de la rétine et de la glande pinéale sont identiques.
M Mirshahi - INSERM U 736
Faculté de Mededecine Paris VI
Quantité : 200 µl
Specifité : réagit avec l'arrestine visuelle (S-antigen), dans un grand nombre d'espèces (humains, autres vertébrés, Amphioxus, nemerteans, annelidés, mollusques)
Immunogène : bovine Arrestin (S-antigen)
Clone : S8D8
|
|
|
|
| Code |
Dénomination |
Clone |
Type |
Condi. |
Inf. |
Fiche |
Prix |
Devis |
| AbC-Mi01 |
ARRESTIN
|
S8d8 |
Mc |
250 µl |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Application :
- Immunocyto/histochimie ; 1/500, coupes paraffines, sections congelées.
- Western blotting ; 1/500 1/1000
(NB la dilution finale doit être déterminée par l'expérimentateur)
Format : ascites en PBS, 0,002% Sodium methiolate
Stockage : pour longue durée stocker les aliquots à - 20°C
| | | | |
|
| | | |
Fig -1 Infiltat lymphocytaire de la rétine (A) et de la glande pinéale " épiphyse " (B) chez des rats lewis immunisés avec l'antigèn S (Arrestine) bovin, observation 10 jours après immunisation (coloration HES).
| | | | |
|
| | | |
L'anticorps monoclonal S8D8 est une immunoglobuline IgG2a, avec chaîne légère kappa, reconnaissant une séquence de 11 acides aminés PVDGVVLVDPE correspondant à la séquence 40-50 de l'arrestine bovine.
| | | | |
| | | |
Anticorps monoclonaux anti arrestine:
|
Ils ont a été obtenus à partir d'hybridomes produisant des anticorps monoclonaux anti-arrestine .
Ces hybridomes proviennent de la fusion de cellules de myélome de souris (NS-1) avec des cellules spléniques de souris Balbc préalablement immunisés avec l'antigène-S de rétine de bœuf .
La sélection des hybridomes a été effectuée en analysant les surnageants d'hybridome grâce à la technique ELISA utilisant des plaques recouvertes d'antigène-S ou de ses fragments. Après clonage, l'isotypie de l'anticorps a été déterminée.
Afin de d'identifier les épitopes reconnus par l'anticorps dans la séquence d'acides aminés de l'arrestine, toute une panoplie de méthodes ont été utilisées:
- analyse en ELISA et en Western-Blot de la réactivité des différents anticorps avec des produits de dégradation de l'antigène-S de bœuf obtenus par digestion à la chymotrypsine et séparation en HPLC.
- analyse en Western blotting de la réactivité des anticorps sur des peptides obtenus après dégradation de l'antigène-S par le CNBr. La localisation des peptides dans la protéine avait été préalablement déterminée par Gregerson D. de l'Université du Minnesota.
- analyse en ELISA de la réactivité des anticorps avec 40 peptides synthétiques de l'antigène S humain de 20 acides aminés chacun et décalés de 10 résidus les uns par rapport aux autres. L'ensemble de ces peptides synthétiques reproduisent la séquence complète de l'antigène-S humain (405 acides aminés).
- la technique du Pepscan a été utilisée pour certains anticorps, afin de permettre une localisation plus fine. Cette méthode consiste à synthétiser sur des pointes de polyéthylène tous les heptapeptides successifs de l'antigène décalés de un ou deux acides aminés. La réactivité en ELISA de ces peptides avec les anticorps étudiés est ensuite analysée.
| | | | |
| | | |
|
Immuno détection de l'arrestine par l'anticorps monoclonal S8D8 ;
|
L'anticorps monoclonal S8D8 a été utilisé pour révéler la présence de l'arrestine par Immunohistochimie sur coupes de tissus de l'œil de plusieurs vertébrés et les photorécepteurs de certains invertébrés (Figure-2).
| | | | |
| | | |
 |
Fig-2 : Les cellules photoreceptrices marqués positivement en immunofluorescence dans la rétine humain, A, Amphioxus B, et Néréis (famille des annelides)C avec anticorps monoclonal anti arrestine bovine.
|
| | | | |
| | | |
L'arrestine a été observée non seulement dans les bâtonnets, mais également dans les cônes grâce à des examens immunohistologiques utilisant l'anticorps S8D8. Cet anticorps monoclonal a été également utilisé pour détecter la présence de l'arrestine dans la glande pinéale et la complexe pinéale de plusieurs espèces animales (Figure 3 et 4).
 |
|
Fig-3 : Les cellules de la glande pinéale de souris marqués positivement en immunoperoxidase avec anticorps moclonal anti arrestine bovine.
|
|
 |
|
Fig-4 : Les cellules de la complexe pinéale de grenouille marqués positivement en immunofluorescence avec anticorps monoclonal anti arrestine bovine.
|
|
| | | | |
| | | |
Exemple :
Chez l'animal normal (rat, souris...), la localisation intracellulaire de l'arrestine dans les cellules photoréceptrices est différente selon l'adaptation à la lumière ou à l'obscurité. A l'obscurité, l'immunoréactivité de l'arrestine est intense dans le segment interne et les compartiments plus internes de la cellule, mais elle est absente du segment externe. Peu après l'exposition de l'animal à la lumière, l'arrestine apparaît dans le segment externe, et l'intensité du marquage diminue fortement dans les autres compartiments. Il a été suggéré qu'à la lumière, il y a un transport actif de l'arrestine vers le segment externe. Ceci a pour conséquence une diminution de sa concentration dans le segment interne et dans le corps cellulaire. Ceci n'a été observé que dans les cellules photoréceptrices de type bâtonnet. Chez le rat RCS dystrophique, ce phénomène de transport de l'arrestine est aboli, aucun déplacement de l'arrestine n'étant observé .
 |
|
glande pinéale de poisson (brochet)
|
| | | | |
| | | |
- 1: Merodio M, Irache JM, Valamanesh F, Mirshahi M. Ocular disposition and tolerance of ganciclovir-loaded albumin nanoparticles after intravitreal injection in rats.Biomaterials. 2002 Apr;23(7):1587-94. PMID: 11922464 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 2: Nicolas C, Ghedira I, Stiemer R, Teufel B, Hecquet C, Faure JP, Mirshahi M. Identification of visual arrestin (S-antigen) in retinal pigmented epithelialcells.Curr Eye Res. 2000 Sep;21(3):677-83. PMID: 11120555 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 3: Nicolas-Leveque C, Ghedira I, Faure JP, Mirshahi M. Beta-arrestin-related proteins in ocular tissues. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999 Jul;40(8):1812-8. PMID: 10393053 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 4: Mirshahi M, Camoin L, Nicolas C, Ghedira I, Cozette J, Faure JP. Co-purification of selected glycolytic enzymes with retinal S-antigen (arrestin)by hydroxyapatite agarose chromatography of bovine retina.Curr Eye Res. 1999 May;18(5):327-34. PMID: 10372993 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 5: Razaghi A, Bonaly J, Chacun H, Faure JP, Mirshahi M, Barque Immunodetection of a protein related to mammalian arrestin in Euglena gracilis.Biochem Biophys Res Commun. 1997 Apr 28;233(3):601-5. PMID: 9168897 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 6: Nato A, Mirshahi A, Tichtinsky G, Mirshahi M, Faure JP, Lavergne D, DeBuyser J, Jean C, Ducreux G, Henry Y. Immunological detection of potential signal-transduction proteins expressed during wheat somatic tissue culture.Plant Physiol. 1997 Mar;113(3):801-7. PMID: 9085574 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 7: Mirshahi M, Thillaye B, Tarraf M, de Kozak Y, Faure JP. Light-induced changes in S-antigen (arrestin) localization in retinal photoreceptors: differences between rods and cones and defective process in RCS rat retinal dystrophy. Eur J Cell Biol. 1994 Feb;63(1):61-7. PMID: 8005106 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 8: Stiemer RH, Gausepohl H, Mirshahi M, de Kozak Y, Kraft M, Faure JP, FrankRW. Immunological characterization of an immunomodulatory epitope inS-antigen/arrestin with a sequence motif common to tumor necrosis factor alpha. Immunol Lett. 1992 May;32(3):233-40. PMID: 1379981 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 9: de Kozak Y, Mirshahi M, Boucheix C, Faure JP. Inhibition of S-antigen-induced experimental autoimmune uveoretinitis by active immunization against anti-idiotypic antibody to an S-antigen epitope.Reg Immunol. 1992 May-Jun;4(3):168-74.
- 10: Stiemer RH, Westenfelder U, Gausepohl H, Mirshahi M, Gundt A, Frank RW,Mannel DN. A common epitope on human tumor necrosis factor alpha and the autoantigen'S-antigen/arrestin' induces TNF-alpha production.J Autoimmun. 1992 Feb;5(1):15-26.PMID: 1373060 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 11: Stiemer RH, Westenfelder U, de Kozak Y, Gausepohl H, Mirshahi M, Frank RW,Faure JP, Mannel DN. Cytokine induction by immunomodulatory epitopes in S-antigen and tumor necrosis factor alpha.Curr Eye Res. 1992;11 Suppl:197-202. Review. PMID: 1385043 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 12: de Kozak Y, Stiemer RH, Mirshahi M, Frank RW, de Smet M, Faure JP. Humoral immune response against the S-antigen/TNF alpha common epitope in rat EAU suppressed by the monoclonal antibody S2D2.Curr Eye Res. 1992;11 Suppl:119-27. PMID: 1385041 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 13: Mirshahi M, Razaghi A, Vandewalle A, Cluzeaud F, Tarraf M, Faure JP. Immunodetection and localization of protein(s) related to retinal S-antigen (arrestin) in kidney.Biol Cell. 1992;76(2):175-84. (MID: 1300198 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 14: Mirshahi M, Razaghi A, Mirshahi SS, Van Tuyen V, Faure JP. Immunopurification of an S-antigen-like protein from human platelets.Thromb Res. 1991 Dec 1;64(5):551-8. PMID: 1808760 [PubMed - indexed for MEDLINE] Mirshahi M, Razaghi A, Mirshahi SS, Van Tuyen V, Faure JP. Immunopurification of an S-antigen-like protein from human platelets.Thromb Res. 1991 Dec 1;64(5):551-8. PMID: 1808760 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 15: Mirshahi M, de Kozak Y, Tarraf M, Razaghi A, Thillaye B, Faure JP. Early disappearance of alpha-transducin in light-induced photoreceptor degeneration in albino rats.Curr Eye Res. 1991 Nov;10(11):993-1000. PMID: 1782808 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 16: Mirshahi M, Nato A, Razaghi A, Mirshahi A, Faure JP. [Presence of arrestin (S-antigen)-like proteins in vegetable cells]C R Acad Sci III. 1991;312(9):441-8. French. PMID: 1905970 [PubMed - indexed for MEDLINE]
- 17: Mirshahi M, Boucheix C, Collenot G, Thillaye B, Faure JP. Retinal S-antigen epitopes in vertebrate and invertabrate photoreceptors.Invest Ophtalmol Vis Sci. 1985 Jul ;26(7) : 1016-21
- 18: Mirshahi M, Faure JP, Brisson P, Falcon J, Guerlotte J, Collin J. S-antigen immunoreactivity in retinal rods and cones and pineal photosensitive. Bio cell . 1984;52(2):195-8
| | | | |
|
